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細胞因子試劑盒的檢測也是很有講究的

2023-02-25 瀏覽次數:306

 
  細胞因子試劑盒主要用于科研方面,不用于臨床診斷,可以用于檢測各種指標。做快速檢測時,待檢測的樣品數越多,出現加錯的概率也就越大,特別容易出錯的是在酶聯偶合物(conjugate)與樣品液或標液混合的階段,因為這時使用的是單道槍。其實解決的方法比較簡單,我們只要把操作上的順序加以調換,即先把待測液或標液加入稀釋孔中,再加入酶聯偶合物就不會出現錯誤了。而且這兩個順序交還對結果也沒有影響,因為這一步的主要目的是讓兩種液體充分混合。
  細胞因子試劑盒從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。靈敏度有二層含義,為試劑檢出被檢物質的低量的能力;為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。特異性常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。精密度一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。準確度:通過添加回收實驗進行評價。
  細胞因子試劑盒在檢測前的工作:
  1、請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
  2、將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F象,可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
  3、標準品:于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
  4、生物素化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
  5、酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

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